RITA® SISTEMA DE INMERSIÓN TEMPORAL PARA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

RITA® Sistema de inmersión temporal para cultivo de tejidos vegetales

PRINCIPALES VENTAJAS DE LA TÉCNICA RITA®

  • Reducción de costes laborales a través del manejo simplificado de plantas y medio.
  • Nutrición mejorada: el medio está en contacto directo con las plantas durante la inmersión y una película capilar cubre la planta durante el período restante.
  • Reducción muy marcada de la asfixia y la vitrificación de los tejidos en comparación con la inmersión permanente.
  • Renovación completa de la atmósfera en cada inmersión.
  • La división del tejido ocurre durante la agitación debido al burbujéo.
  • Control del proceso morfológico mediante la modificación de la frecuencia y duración de la inmersión.
  • Protección de cada aparato garantizada por salidas de aire. El manejo individual es posible. Sin riesgo de propagación de contaminación.

LOGROS EN ALGUNOS CULTIVOS TROPICALES

Mejoras en comparación con el cultivo en un medio semisólido:

Café

  • Microcortes: la misma tasa de multiplicación en la mitad del tiempo.
  • Embriogénesis: el costo del procedimiento desde la célula embriogénica hasta el embrión germinado se reduce en un factor de 10.

Plátano

  • Desarrollo y germinación de embriones somáticos: cada Rita® puede producir de 700 a 1000 plántulas listas para endurecerse.
  • Proliferación de meristemos: la tasa de proliferación de 20 días se puede multiplicar por 2.5

Árbol de goma

  • Desarrollo de embriones somáticos: 100 a 400 embriones por aparato Rita® listos para germinar en un medio semisólido.

Papas:

  • Microtuberización: Producción de 3 microtubérculos a partir de un microcorte de un solo nodo en 10 semanas. Más del 50% de los microtubérculos pesan más de 0,5 g.

Laboratorios Piloto:

Uganda
En Uganda, la instalación de un laboratorio industrial para café y banano fue financiada por la Unión Europea. 2 cámaras de cultivo están equipadas con RITA®, es decir, un total de 1600 aparatos RITA®. La capacidad de producción es de 7 a 8 millones de plántulas por año.

Nicaragua
Un programa de mejoramiento de café para Coffea arabica encabezado por PROMECAFE, con la participación del CATIE, se inició en América Central en 1994 e involucra a 5 países centroamericanos, República Dominicana y un grupo de organizaciones de desarrollo francesas (CIRADS, ORSTOM, MAE). El objetivo del programa es el desarrollo y la distribución a gran escala, mediante la multiplicación por la técnica RITA®, de genotipos mejorados.

PUBLICACIONES:

D.Alvard, F.Cote, C.Teisson, 1993. Comparison of methods of liquid medium culture for banana micropropagation. Plant Cell Tiss. Org. Cult.32:55-60
J.V.Escalant, C.Teisson, F.Cote, 1994. Amplified somatic embryogenesis from male flowers of triploid banana and plantain cultivars (Musa sp.). In Vitro Cell. Dev. Biol. 30:181-186
C.Teisson, D.Alvard, 1994, A new concept of plant in vitro cultivation in liquid medium : temporary immersion. In : VIIIth International Congress of Plant Tissue and Cell Culture (pp S2-2) Abstract
M.Berthouly, M.Dufour, D.Alvard, C.Carasco, L.Alemanno, C.Teisson, 1995 Coffe micropropagation in liquid medium using temporary immersion technique, ASIC, Kyoto, VolII: 514-519C.
C.Teisson, D.Alvard, M.Berthouly, F.Cote, J.V.Escalant, H.Etienne, 1996, New apparatus for culturing plant tissues by temporary immersion, International Symposium on Plant Production in Closed Ecosystems, Narita, A 1-3
Cabasson, D.Alvard, D.Dambier, P.Ollitrault, C.Teisson, 1997. Improvement of Citrus somatic embryo development by temporary immersion. Plant Cell Tiss. Org. Cult.0:1-5
H.Etienne, B.Bertrand, F.Anthony, F.Cote, M.Berthouly, 1997, L’embryogénèse somatique, un outil pour l’amélioration génétique du caféier, ASIC, Nairobi
H.Etienne, M.Lartaud, N.Michaux-Ferrière, M.P.Carron, M.Berthouly, C.Teisson, 1997, Improvement of somatic embryogenesis in Hevea Brasiliensis (Müll.Arg) using the temporary immersion technique, In Vitro Cell. Dev. Biol. 33:81-87
C.Teisson, D.Alvard, 1998, In vitro propagation of potato microtubers in liquid medium using temporary immersion, Conf. Potato seed production by tissue culture, Brussels, Cost 822, European Commission
C.Teisson, D.Alvard, M.Lartaud, H.Etienne, M.Berthouly, M.Escalona, J.C.Lorenzo, 1998, Temporary immersion for tissue culture, IXth International Congress of Plant Tissue and Cell Culture, Jerusalem

¿CÓMO FUNCIONA RITA®?

RITA es un aparato especialmente diseñado para llevar a cabo un cultivo de plantas in vitro utilizando inmersión temporal. Es compuesto por componentes reutilizables y autoclavables.

Funcionamiento Sistema RITA

Inmersión Temporal
Dependiendo de su tamaño, las plantas se colocan en la canasta o en la red y el medio nutriente se coloca en el fondo del recipiente. El aire comprimido ingresa a través del tubo central creando una presión excesiva en el medio líquido dentro de la campana. Esto empuja el líquido hacia la cámara en forma de anillo formada por el vaso y la campana. El líquido pasa a través de los agujeros en la canasta y las mallas de la red y sumerge las plantas. Tan pronto como todo el medio líquido alcanza el compartimento superior, el flujo de aire lo agita y oxigena continuamente. Sobrepresión escapa a través de la salida en el borde de la tapa. Cuando el suministro de aire comprimido se detiene, la presión en los compartimentos superior e inferior se ajusta a la presión atmosférica a través de las salidas y la válvula solenoide. El medio líquido vuelve al fondo del recipiente.

Aplicación de presión y control de flujo de aire.
El aire comprimido debe ser sin aceite. Puede aplicarse directamente mediante una bomba de aire o desde un tanque de aire. La sobrepresión debe ser inferior a 0,2 bar. El flujo de aire se esteriliza a través de salidas de aire hidrofóbicas en los puertos de entrada y salida. Estas salidas de aire tienen un caudal de aire lo más alto posible a la presión atmosférica para permitir un reajuste rápido de la presión en los dos compartimentos. El flujo de aire a través de cada recipiente debe ser controlado (0,8 a 1 l / mn) por una válvula para reducir la velocidad de burbujeo cuando las plantas están sumergidas. Se debe usar un chorro que permita el control independientemente de si el tubo está conectado a un recipiente o no.
Una bomba de aire puede operar varios recipientes por medio de un colector. El número de ramas que puede tener el múltiple dependerá de la potencia de la bomba. Se pueden conectar varios colectores a la misma bomba y se pueden programar individualmente.

Programación
La frecuencia y duración de los períodos de inmersión varían mucho con las especies y con los fenómenos requeridos. Experimentos previos han demostrado que estos pueden variar de 4 períodos de 15 minutos por día a 1 período de 1 minuto por semana. Se debe realizar una experimentación preliminar para encontrar la frecuencia y duración óptimas en cada caso particular. Las funciones de arranque y parada de la bomba pueden controlarse mediante cualquier temporizador programable que permita el número requerido de interrupciones de encendido y apagado por día o semana y la duración requerida (resolución 1 o 15 minutos).

COMPONENTES Y MONTAJE RITA

Montaje RITA

EQUIPOS REQUERIDOS:

Suministro de aire: bomba de aire o compresor capaz de suministrar 1 litro / min (0.06m3 / h) por Rita® a 200 mbar (hPa). Esterilización por un respiradero antes de cada Rita®.

Automatización: un temporizador con un mínimo de 1 minuto / día, un colector (incluye una válvula solenoide de 3 vías, boquillas y tubos). Proporcionamos RITA y colector (para 6 o 20 RITA) para 110 V o 220 V.

Por razones de estándares eléctricos, no proporcionamos la bomba de aire y los temporizadores.

Instalación Eléctrica y Neumática RITA

MANEJO RITA

Limpieza
Para una limpieza satisfactoria, todo el aparato debe desmontarse por completo. La limpieza con detergente que contenga anillos aromáticos puede inducir el agrietamiento de la polisulfona durante el autoclavado. Si usa discos de espuma de poliuretano (ya no están a la venta), son repuestos de un solo uso.

Esterilización
Configure el RITA con sus salidas de aire (consulte el plan de montaje). La tapa no debe cerrarse demasiado antes de esterilizar en autoclave para evitar deformaciones.
Agregue algunos mililitros de agua dentro del RITA dependiendo del tipo de autoclave que use para asegurar un buen nivel de presión.
Proteja las rejillas de ventilación contra la humedad con láminas de aluminio. Marcarlos en cada ciclo de autoclave. Aconsejamos un máximo de 10 ciclos de autoclave.
Autoclave siguiendo las condiciones estándar (no podemos ser más precisos ya que las condiciones dependen del tipo de autoclave).
Esterilice el medio por separado (calor o filtración) y vierta el RITA estéril bajo flujo laminar (200 ml por RITA a máx.).

Cambio medio y transferencia de planta
Cada aparato, junto con sus salidas de aire, puede desconectarse fácilmente de la red de aire comprimido y transportarse a una cabina de flujo de aire laminar para el manejo de la planta. Desinfecte el RITA a fondo (insista en los márgenes de la tapa).
El medio se puede cambiar de manera muy simple de diferentes maneras sin tener que manejar cada planta por separado:
Se prepara un nuevo recipiente estéril sin sus componentes internos (campana, canasta, espuma y tubo central) y se llena con medio nuevo. La parte interior del recipiente anterior que contiene las plantas se coloca dentro del nuevo recipiente.

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